Çalışma mesafesi, örnek ile lens arasındaki mesafeyi açıklamak için mikroskopide kullanılan bir terimdir. Mikroskoplar genellikle kısa bir çalışma mesafesine sahiptir.
Mikroskoplar, büyütme veya odak uzaklığı değiştiğinde odakta kalan parfokal bir mercek kullanır. Çalışma mesafesi, ön lens elemanı veya mikroskop lensinin ucu ile en yakın kapak kayma yüzeyi arasındaki boşluğu ifade eder. Kapak kayması, bir numunenin üzerine yerleştirilen ince koruyucu kapaktır. Kapak kayması olmayan örneklerde çalışma mesafesini hesaplamak için ön lensin numune yüzeyine doğrusal ölçümü kullanılır.
Toksik veya metalurjik örnekler gibi bazı maddeler, kalın örtü fişleri gerektirir. Bu gibi durumlarda, çalışma mesafesi ekstra uzun (ELWD) veya süper uzun (SLWD) olarak tanımlanır.