İyot çözeltisi, lekeyi daha belirgin hale getiren ve kristal mor boyasının bakteriyel hücreye daha sıkı bağlanan bir mordan görevi görür. İyot çözeltisi veya potasyum klorür ilave edilmesi, ikinci adımdır gram boyama işlemi.
Gram boyama, gram negatif ve gram pozitif bakterileri ayırt etmek için kullanılan yaygın ve en yaygın kullanılan tekniktir. Bu işlem, bakterilerin çevrelerine farklı tepki göstermesi, dolayısıyla farklı tepki vermesi (veya boyanması) prensibine dayanarak tanımlanmasına yardımcı olur.
Tahıl boyama işlemi aşağıdaki adımları içerir:
1. Adım
Bakteriler, kristal mor boya ile iyot çözeltisi ile muamele edilir.
2. Adım
Lekelemeden sonra numuneye renk giderici ajanlar ilave edilir. Bu, bakterilerin peptidoglikan katmanını kurutur, küçültür ve sıkılaştırır. Boyama maddeleri daha kalın peptidoglikan tabakası nedeniyle gram pozitif bakterilerin hücreleri içinde tutulur, gram negatif bakteriler ince tabakası nedeniyle leke üzerinde duramazlar.
3. Adım
Örneğe kırmızı lekelenen bir su perdesi eklendi. Kırmızı renklendirme, gram pozitif hücrelerin mor renklenmesinin rengini değiştirmez. Bunun tersine, gram negatif bakterilere kırmızı renk ekler.
