24 saatten eski kültür örnekleri yanlış kristalin mor leke tutma kabiliyetlerini yitirerek lekelenebilir. Gram-pozitif olduklarında gram negatif organizmalar olarak görünebilirler veya numune gram değişken bir sonuç gösterebilir.
Gram boyaları, laboratuardaki organizmaların hücre duvarlarındaki yapısal farklılıkları ortaya koymaktadır. Gram-pozitif organizmalar yüzde 90'a kadar peptidoglikan içeren kalın bir hücre duvarına sahiptir ve kristal viyole ile boyadıktan sonra mikroskobun altında mavi veya mor görünür. Gram negatif organizmalar, yüzde 10'a kadar peptidoglikan ve yüksek lipid içeriği içeren çok daha ince bir hücre duvarına sahiptir. Bu organizmalar kristal viyole ile boyadıktan sonra mikroskop altında kırmızı veya pembe görünür.
Gram boya bulaşıcı hastalığın çalışılması ve tedavisine entegre olan kritik bir laboratuvar testidir. Pek çok antibiyotik, gram-negatif veya gram-pozitif organizmalar üzerinde hücre duvarlarını parçalamalarından dolayı çalışır. Geniş spektrumlu antibiyotikler hem gram negatif hem de gram pozitif organizmalar üzerinde çalışır.
Gram boyası, 1884 yılında Hans Christian Gram tarafından yaratıldı. Zatürreden ölenlerin akciğer dokusu örneklerinde kokciyi görmenin bir yolunu arıyordu. Primer boyası olarak kristal menekşe, ardından sabitleyici olarak iyot ve renk giderici olarak etanol kullandı. Renk giderici adım, gram pozitif ve negatif organizmaları birbirinden ayıran mavi-mor renk kaybını yaratır.
