Şeker, fermantasyon testinde olumlu sonuç vermez. Fermantasyon, şekerlerin farklı bir kimyasal ürüne dönüştürüldüğü işlemdir. Bir fermantasyon testinde, bakterilerin varlığını belirlemek için spesifik şekerler kullanılır. Olumlu bir sonuç, asit, gaz veya alkol oluşumu olacaktır.
Fermantasyon testinde kullanılan şekerler, ürettikleri ürünlere ve bu sonuçlara hangi bakterilerin yol açtığı esas alınarak özel olarak seçilir. Örneğin, mannitol tuzu agarı, tuza dayanıklı Staphylococcus bakterileri dışındaki çoğu bakteri öldürür. Sadece bazı Staphylococcus suşları, asidik yan ürünler üreten Staphylococcus aureus gibi agardaki mannitol ile reaksiyona girer. Mannitol tuzu agarı, bu reaksiyonu belirtmek için daha yüksek asitlik seviyelerinde varlığında sarıya dönüşen kırmızı bir pH göstergesine sahiptir.
Fermantasyon testleri, istenen sonuca ve test edilen bakterilere bağlı olarak farklı ortamlarda gerçekleştirilir. En yaygın iki medya, et suyu ve ağardır. Agar, deniz yosunundan üretilen ve çoğu bakterinin yüzeyinde çoğalmasına izin veren jöle benzeri bir bileşiktir ve çeşitli besin maddeleri ve kimyasallarla aşılanabilir. Bir et suyu kimyasal çözeltilerden oluşur. Bazı büyüme türlerini kısıtlayan ortamlara seçici denir. Fiziksel bir değişiklik gösteren ve belirli ürünleri test etmek için kullanılan ortamlara diferansiyel denir. Bu diferansiyel medya, fermantasyon testleri de dahil olmak üzere birçok doğrulama testinin temelidir.