Shakesperian oyunda "Macbeth", Macduff, Duncan'ın oğlu ve varisi Malcolm'un desteğine gitmek için Duncan'ın Macbeth tarafından öldürülmesine cevap olarak İngiltere'ye kaçmayı seçti. Ancak İngiltere'ye kaçarken Macduff, Macbeth tarafından yanıt olarak öldürülen kendi ailesini kınadı. İngiltere'ye kaçarken Macduff, Malcolm'u İskoç tahtını bir güç gösterisi ile geri almaya ikna etmeye de çalışıyor.
Oyunda, Macduff'un ilk diyalogu Macbeth'in kalesinde Kral Duncan'ın cesedinin keşfini içeriyor. İngiltere'ye kaçma kararı Macbeth'in aslında Duncan'ın katili olduğu yönündeki şüphesinden kaynaklanıyor. İngiltere'de ve Malcolm'u harekete geçmeye ikna etmeye çalışırken, Macduff ailesinin ölümü ve davranışının Ross adına bir başka İskoç tarafından daha fazla bildirildiği bilgisini verir.
Macduff, Malcolm ve İngiliz müttefikleri ile birlikte İskoçya'ya döner ve Dunsinane Kalesi'ndeki savaşında Macbeth ile tanışır. Macduff sonunda Macbeth'i öldürdü, oyunda bu durumun dışında kaldı. Daha sonra başını Malcolm'a sunar ve onu İskoçya'nın haklı kralı ilan eder.
King Duncan'ın Macbeth tarafından öldürülmesinden önce, Macduff, Fife of Thane unvanını aldı. Macduff'a yapılan ilk referanslar "Chronica Gentis Scotorum" adlı 14. yüzyıldan kalma bir çalışmada bulundu.
