Ohio Nehri haritasında bazı önemli şehirler Pittsburgh, Pennsylvania; Cincinnati, Ohio; Louisville, Kentucky; Huntington, Batı Virginia; ve Evansville, Indiana. Ohio Nehri boyunca göze çarpan diğer yerler ise Parkersburg, Wheeling ve Weirton’un Batı Virginia kentleri ve Kentucky’deki Owensboro kenti.
Ohio Nehri Pittsburgh'da başlar. Oradan, nehir Pennsylvania'nın Sewickley, Coraopolis, Ambridge ve Aliquippa kentleri tarafından kuzeye akar. Rochester kasabasında, Ohio Nehri batıya döner. Nehir daha sonra Pennsylvania'nın Ohio eyaletiyle olan sınırına ulaşmadan önce Beaver ve Midland kasabalarından geçer.
Ohio şehir East Liverpool'u geçtikten sonra nehir güneye döner. Nehir yolu, Ohio'nun Batı Virginia sınırını tanımlar. Nehrin Ohio tarafındaki şehirler arasında Steubenville, Martins Ferry, Marietta ve Gallipolis bulunmaktadır. Nehrin Batı Virginia tarafındaki şehirler arasında Wheeling, New Martinsville, Parkersburg, Point Pleasant ve Huntington bulunur.
Ohio şehri Ironton civarında, Ohio Nehri, Ohio eyaleti ile Kentucky eyaleti arasındaki sınırı belirlemeye başlar. Ohio sınırındaki bazı Kentucky şehirleri Ashland, Vanceburg, Maysville, Brooksville ve Newport'tur. Nehir Cincinnati'yi geçtikten sonra nehir, Kentucky'nin Indiana ile sınırını belirlemeye başlar. Indiana kasabası Wilson Dağı'nı geçtikten sonra, Ohio Nehri, Kentucky'nin Illinois sınırını tanımlar. Ohio Nehri, Illinois, Cairo'daki Mississippi Nehri'ne boşaltır.
